Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням




Скачати 152.48 Kb.
НазваВиготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням
Дата конвертації13.09.2013
Розмір152.48 Kb.
ТипДокументы
skaz.com.ua > Біологія > Документы
ІНСТРУКЦІЯ

до проведення практичного заняття №8
Дисципліна: «Мікробіологія з основами імунології та технікою мікробіологічних досліджень»

Тема: Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням

Спеціальність: «Лабораторна діагностика»


Оснащення:

- термостат, анаеростат;

- паровий стерилізатор;

- згортувач Коха;

- бактеріологічна петля;

- спиртівка, сухий спирт, сірники;

- лабораторний посуд;

- індикатори;

- поживні середовища, їх складові та реактиви;

- ваги з різновагами;

- електричні плитки;

- маркер;

- дезінфекційні розчини;

- гумові рукавички, мило, рушник.

Конкретні цілі:

Знати:

Живильні середовища: призначення, класифікацію, етапи виготовлення, контроль якості виготовлення живильних середовищ. Особливості стерилізації живильних середовищ, умови і терміни зберігання.

Вміти:

- Дотримуватися правил роботи і техніки безпеки з апаратурою.

- Виготовляти основні живильні середовища: МПА, МПБ.

- ДДС: Ендо, Левіна, Плоскірєва, вісмут-сульфіт агару, вуглеводних середовищ Гісса і спеціальних середовищ: сироваткового, кров’яного і цукрового агару.

- Виготовляти середовища для культивування анаеробів: Кітта-Тароцці, ВСА, молока за Тукаєвим, агару для трубок Вейона.

- Визначати рН поживного середовища.

^ Практичні навички:

- Виготовлення поживних середовищ.

- Визначення рН поживного середовища.

- Дотримання правил техніки безпеки, охорони праці в галузі, професійної безпеки, протиепідемічного режиму, чинних наказів МОЗ України під час роботи з електроапаратурою.

^ Хід заняття:

Завдання №1. Ознайомтесь з етапами виготовлення живильних середовищ. Запишіть алгоритми виконання практичних навичок.

Виготовлення поживних середовищ здійснюють у спеціально відведеному для цього приміщенні – середовищеварці, яка повинна бути обладнана:

- шафами для зберігання поживних середовищ і їх компонентів, а також для зберігання готових основ та середовищ;

- вагами з різновагами;

- електричними або газовими плитками;

- рН-метром;

- холодильниками;

- лабораторним та мірним посудом, посудом для варіння середовищ.

Алгоритм «Виготовлення простого живильного середовища МПА
(м'ясо-пептонного агару)»



ЕТАПИ

ОБҐРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП

1. Вивчіть склад м'ясо-пептонного агару (МПА) і інструкцію по його приготуванню.

2. Зробіть розрахунки компонентів МПА.

3. Зважте необхідні компоненти, відмірте заданий об’єм води.

4. Вилийте у посуд воду і компоненти середовища.


Для правильного приготування.


ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ

1. Варіть середовище до кипіння при постійному перемішуванні (агари мають здатність пригорати).

2. Зніміть з вогню, визначте рН за допомогою потенціометра (рН-метру) або індикаторного папірця.

3. Виготовлений агар розлийте у флакони (не більш ніж на 2/3 об’єми флакону, щоб при стерилізації у автоклаві уникнути намочування пробки), закрийте ватно-марлевою пробкою, а потім паперовим ковпачком, зав’яжіть стрічкою.

4. МПА належить до простих за складом поживних середовищ і його стерилізують у автоклаві при 1200 (1 атм.) протягом 20 хвилин.

5. Після стерилізації агар охолоджують до температури 550 і розливають у стерильні чашки Петрі або пробірки.


Для попередження пригорання.

Для створення оптимальних умов вирощування.
Для правильного фасування.

Для створення асептичних умов.

Для розливання.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. На флакони наклейте етикетку, на якій вкажіть назву середовища, дату приготування і термін зберігання.

2. МПА у флаконах можна зберігати при кімнатній температурі протягом 2 тижнів, у чашках Петрі і пробірках (зкошений агар) – 5 днів.

3. Приберіть робоче місце.

4. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.


Для маркування.

Для правильного зберігання.


Забезпечується інфекційна безпека.


Алгоритм «Виготовлення вуглеводних середовищ Гісса»


ЕТАПИ

ОБҐРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП

1. Вивчіть склад бульйону з глюкозою або середовищ Гісса і інструкцію по їх приготуванню.

2. Зробіть розрахунки компонентів.

3. Зважте необхідні компоненти, відмірте заданий об’єм води.

4. Вилийте у посуд воду і компоненти середовища, крім глюкози (іншого вуглеводу) і індикатору.


Для правильного виготовлення.

Для попередження розкладання вуглеводу під дією високих температур.




ЕТАПИ

ОБҐРУНТУВАННЯ

ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ

1. Варіть середовище до кипіння при постійному перемішуванні. Зніміть з вогню і додайте необхідну кількість глюкози.

2. Визначте рН за допомогою потенціометра (рН-метру).

3. Додайте необхідну кількість індикатору.

4. Виготовлений цукровий бульйон розлийте у флакони, пробірки, закрийте ватно-марлевою пробкою, паперовим ковпачком, зав’яжіть стрічкою.

5. Середовища Гісса належить до складних поживних середовищ і їх стерилізують у автоклаві при Т-1120 (0,5 атм.) протягом 15 хвилин або текучою парою 3 дні підряд протягом 60 хвилин.


Для попередження пригорання.

Для попередження розкладання вуглеводу під дією високих температур.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. На флакони наклейте етикетку, на якій вкажіть назву середовища, дату приготування і термін зберігання.

2. Цукровий бульйон, середовища Гісса у флаконах можна зберігати при температурі 3-40 (у холодильнику) протягом 2 тижнів.

3. Приберіть робоче місце.

4. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.


Для маркування.

Для правильного зберігання.


Забезпечується інфекційна безпека.


Алгоритм «Виготовлення спеціальних живильних середовищ:
сироваткового, кров’яного агару»



ЕТАПИ

ОБҐРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП

1. Кров’яний (КА) та сироватковий агар (СА) готують з основних живильних середовищ.


ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ

1. До розігрітої і остудженої до 550 основи (МПА), дотримуючись правил асептики (у боксах), додають 5% крові або 20% сироватки великої рогатої худоби і ретельно переміщують.

2. Розливають середовище у стерильні чашки Петрі по 15-20 мл, злегка піднявши кришку чашки.

3. Середовища, які вміщують сироватку або кров, придатні до вживання протягом 1 доби при зберіганні у холодильнику.


Забезпечується інфекційна безпека.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.


Забезпечується інфекційна безпека.


Алгоритм «Виготовлення диференціально-діагностичних середовищ (ДДС)»


ЕТАПИ

ОБҐРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ ЕТАП

1. Вивчіть інструкцію по приготуванню ДДС (Ендо, Плоскірєва, Левіна, вісмут-сульфіт агар).

2. Зробіть розрахунки кількості води і живильних середовищ, необхідних для приготування.

3. Вилийте у посуд воду і компоненти середовища.

4. Стерильні чашки Петрі підпишіть зі зворотної сторони.


Для правильного приготування.

Маркування жильних середовищ.

ІІ. ВИКОНАННЯ НАВИЧКИ

1. Варіть середовище до кипіння при постійному переміщуванні.

2. Зніміть з вогню. Дайте охолонути до 70-800 і розлийте у стерильні чашки Петрі шаром товщиною 3-4 см.


Для попередження пригорання.
Для подальшого використання.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Приберіть робоче місце.

2. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.



Забезпечується інфекційна безпека.


Завдання №2. Під керівництвом викладача, згідно з алгоритмами виконання практичних навичок, приготуйте живильні середовища: 100 мм Плоскірєва, 0,5 л МПА, 200 мл середовища Ендо, 100 мл цукрового бульйону, 20 мл основи для сироваткового агару (СА), 100 мл кров’яного агару (КА), 100 мл ВСА, 100 мл Левіна.
^ Завдання №3. Запишіть у щоденник середовища для культивування анаеробів.


Середовище Кітта-Тароцці

готують на основі бульйону Хоттінгера, до якого додають шматочки бичачої печінки або м’яса. Стерилізують при 1 атм. протягом 30 хвилин, рН середовища 7,4-7,6. Після посіву матеріалу середовище заливають зверху шаром вазелінової олії товщиною до 1 см.

^ Середовище Вільсон-Блера

його готують на основі розтопленого і охолодженого до 600С 1% цукрового (глюкоза) МПА рН 7,4 з додаванням на 100 мл 10 мл стерильного 20% розчину сульфіту натрію і 1 мл 8% розчину хлориду заліза.

Готове середовище не стерилізують!

Лакмусове
молоко


готують середовище із свіжого молока. Попередньо його кип’ятять і залишають у прохолодному місці на 1 добу. Знімають верхній шар жиру і процедуру повторюють. Молоко фільтрують і 10% розчином бікарбонату натрію доводять рН до 7,2. Перед стерилізацією до молока додають 5-10% лакмусової настойки та ідентичну кількість 10% розчину бікарбонату натрію, щоб піна молока набула синьо-фіолетового відтінку.


^ Завдання №4. Вивчіть: Апаратуру для культивування мікроорганізмів - термостат, анаеростат, ексикатор, правила роботи з апаратурою.
Будова, призначення термостату

Умови, необхідні для культивування мікроорганізмів у мікробіологічній лабораторії, забезпечуються в термостаті.

Термостат призначений для підтримання у внутрішній частині робочої камери стабільної температури, необхідної для проведення бактеріологічних і серологічних досліджень.

Основними частинами термостату є: корпус, металеві дверцята, прозорі дверцята, робоча камера, блок управління. Корпус виготовлений із тонколистового металу. Всередині корпусу встановлена робоча камера, в нижній частині якої закріплені два нагрівальних елементи. Простір між корпусом і камерою заповнений теплоізоляційними прокладками, зробленими з гофрованого картону. Корпус закривається металевими дверцятами.

Металеві дверцята зроблені у вигляді двохстінної коробки з тонколистового металу. Простір між двома стінками заповнений ізоляційними прокладками. По периметру дверцят укріплена гумова магнітна прокладка для ущільнення між дверцятами і корпусом термостата.

На дверцятах і корпусі є два гвинти з отворами для проволоки, на яку вішають пломбу.

Прозорі дверцята дають змогу спостерігати за процесом у робочій камері, не відкриваючи їх і не порушуючи температурний режим.

Прозорі дверцята по периметру обклеєні прокладкою з гуми для ущільнення між дверцятами і робочою камерою.

Робоча камера має прямокутну форму, її стінки виготовлені з латуні. У верхній частині камери встановлено датчик температури. Для усунення місцевого перегрівання бічні стінки і дно камери обклеєні азбестовим папером. Температурний режим у робочій камері контролюється термометром, який встановлюється через отвір, що розміщений у блоці керування. Всередині камери встановлено металеві полички з отворами для полег­шення циркуляції повітря.

Блок керування призначений для автоматичного регулю­вання та підтримання температури в робочій камері. На панелі блоку керування встановлено тумблер, запобіжники, кнопковий замикач, сигнальну лампу включення в електромережу і одночасно для підсвічування шкали термометра; сигнальну лампу включення нагрівальних елементів термостата, ручки резисторів для встановлення температурного режиму.

Оптимальну температуру створюють у термостаті. Більшість патогенних мікробів ростуть за температури 370С.
^ АЛГОРИТМ «Підготовка термостата до роботи»:

- перевірте, чи заземлений термостат;

- підключіть апарат до електромережі, поверніть тумблер у бік напису «мережа» (рос. мовою - «сеть») - сигнальна лампочка світиться у напівнакалі;

- поверніть ручку резистора, встановіть потрібну температуру;

- відкрийте дверцята;

- поставте чашки Петрі в робочу камеру термостата догори дном;
УВАГА! Чашки Петрі розміщують на поличках і дні робочої камери гіркою оптимально не більше ніж по 5 штук, нещільно, що забезпечує циркуляцію повітря і рівномірне нагріван­ня всіх чашок. Чашки обов'язково ставлять догори дном. Це забезпечує добру аерацію чашок і запобігає потраплянню конденсаційної води з кришки чашки на посів, яка перешкоджає утворенню ізольованих колоній.
- закрийте прозорі дверцята;

- закрийте металеві дверцята.
^ Методи культивування облігатних анаеробів

Особливість облігатних анаеробів полягає в тому, що вони можуть існувати і розмножуватися за умов майже повної відсутності кисню (хоча серед них також є мікроорганізми, що більше і менше чутливі до кисню). Для їх культивування потрібно створити умови, за яких молекулярний кисень видаляється з поживного середовища і навколишнього простору, де перебуває культура облігатних анаеробів.

Залежно від способу видалення кисню розрізняють такі методи їх культивування: фізичні, хімічний і біологічний.

^ Фізичні методи ґрунтуються на механічному видаленні або запобіганні проникненню кисню в поживне середовище або в навколишній простір.

^ Вирощування в анаеростаті. Анаеростати бувають стаціонарні і портативні. Анаеростат – це товстостінний металевий апарат прямокутної або циліндричної форми з дверцятами або кришкою, які герметично закриваються. Атмосферний тиск у робочій камері апарату вимірюється вакуумметром, шкала якого розрахована від «0» (що означає нормальний атмосферний тиск – 1 атм.) до «-1» (що означає повний вакуум). Видалення повітря проводять через кран, який потім щільно закривають. Посуд з посівом (частіше чашки Петрі) вміщують у робочу камеру апарата, апарат щільно закривають, повітря з камери видаляють за допомогою вакуум-насоса. Культивують мікроорганізми у вакуумі або в атмосфері газу, що не містить кисню. В останньому випадку у робочу камеру анаеростата подають азот, суміш азоту і вуглекислого газу, водень, пропан з бутаном. Стаціонарний анаеростат підключають до електромережі, а портативний ставлять у термостат. Анаероби ростуть повільно, тому анаеростат відкри­вають через 4-5 діб.

^ Метод Віньяля—Вейона. У пробірку з розплавленим і охолодженим до 43-45°С напіврідким агаром піпеткою вносять досліджуваний матеріал і добре перемішують. Потім агаром з посівом заповнюють стерильну пастерівську піпетку, яка з одного кінця щільно закрита ватною пробкою. Піпетку запов­нюють до кінця, не допускаючи попадання повітря. Нижній кінець піпетки запаюють у полум'ї спиртівки. Засіяні піпетки вміщують у велику пробірку, на дні якої накладена вата, або загортають у щільний папір і поміщають у термостат. Колонії мікроорганізмів добре видно через скло. Вони мають вигляд двояковипуклої лінзи або жмутика вати. Після культивування роблять надріз піпетки терпугом поряд з колонією, ламають пі­петку, зафламбованою петлею відбирають колонію і пересівають її на стерильне поживне середовище для виділення чистої культури анаеробів.

^ Культивування у високому стовпчику агару. Щільне серед­овище (наприклад, Вільсона-Блера) наливають у велику хімічну пробірку на 2/3 її висоти. Перед посівом його розплавляють і охолоджують до температури 43-45°С. Швидко роблять посів піпеткою, добре перемішують (прокручують пробірку між долонями рук) і ставлять у банку з холодною водою, щоб не відбулося насичення середовища киснем з повітря. Після ущільнення агару пробірки поміщають у термостат для культивування мікроорганізмів. Анаероби ростуть у нижній частині середовища.

Застосування поживного середовища Вільсона-Блера для культивування облігатних анаеробів ґрунтується на тому, що воно має щільну консистенцію, наливається високим стовпчи­ком, містить у собі глюкозу (редукуюча речовина). Крім того, воно містить натрію сульфіт і заліза хлорид (ІІ). Під впливом анаеробів натрію сульфіт відновлюється до натрію сульфіду, який після взаємодії із заліза хлоридом(ІІ) утворює заліза сульфід - речовину чорного кольору. Тому анаероби у середовищі Вільсона-Блера утворюють колонії чорного кольору.

^ Метод Перетца. Посівний матеріал наносять бактеріологічною петлею чи пастерівською піпеткою на середовище МПА в чашку Петрі, рівномірно розсівають шпателем. На поверхню посіву кладуть зафламбоване стерильне предметне скло так, щоб під склом не залишилося кульок повітря. Чашки Петрі ставлять у термостат донизу дном. Анаероби виростають під склом, поряд зі склом ростуть аероби. Враховують ті колонії, які ростуть під склом на відстані, не ближчій ніж 0,5 см від краю скла.

Під час культивування облігатних анаеробів у рідких поживних середовищах спочатку проводять їх регенерацію (кип’ятять середовища на водяній бані 20-30 хв. для видален­ня повітря). Потім середовище різко охолоджують і роблять посів (регенеровані середовища мають бути використані протягом 20-30 хв., в іншому разі їх повторно регенерують). Після посіву середовище заливають стерильним вазеліновим маслом шаром 1-1,5 см. До таких поживних середовищ належить середови­ще Кітта-Тароцці. На ньому анаероби утворюють дифузний ріст, унаслідок чого воно мутніє.

Хімічний метод ґрунтується на видаленні кисню хімічними речовинами. Для поглинання кисню з навколишнього простору використовують метод Арістовського. На дно ексикатора поміщають хімічні речовини, які легко поглинають кисень із повітря (натрію гідросульфіт або багатоатомний фенол - піргалол). У розширену частину ексикатора поміщають чашки Петрі з посівами і щільно закривають кришкою. Ексикатор ставлять в термостат.

Для поглинання кисню з поживного середовища до нього додають редукційні речовини: глюкозу, тіогліколеву кислоту, аскорбінову кислоту, натрію гідрокарбонат, натрію гідросульфіт, натрію форміат тощо, а також шматочки варених паренхіматозних органів тварин (печінки, серця), для адсорбції кисню використовують кульки вати, пемзу.

Біологічний метод ґрунтується на культивуванні анаеробів і аеробів в одному середовищі. До нього належить метод Фортнера. Поживне середовище МПА з кров’ю (агар Цейсслера) наливають у чашку Петрі. Зафламбованим скальпелем виріза­ють по діаметру чашки вузеньку смужку агару (завширшки 1-1,5 см) і видаляють її з чашки. На одну половину середовища засівають аероби (кишкову паличку), на інші - досліджуваний матеріал. Чашку закривають і заклеюють клейкою стрічкою, лейкопластиром або пластиліном. Чашки поміщають у термостат догори дном. Аероби ростуть швидко і поглинають кисень створюючи умови для росту анаеробів. На кров’яному агарі визначають гемолітичні властивості анаеробів.

Усі ці дослідження проводять у спеціалізованих анаеробна лабораторіях.




Завдання №5. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.
Завдання №6. Оформіть щоденник. Зробіть висновки.




Література:

Ситник І.О., Климнюк С.І., Творко М.С. «Мікробіологія, вірусологія, імунологія», стор. 78-82, 94-106.

Люта В.А., Кононов О.В. «Практикум з мікробіології», стор. 45-46, 139-142.



Схожі:

Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням icon«Виготовлення настінного календаря» 8 клас
Підбір та аналіз матеріалів для виготовлення виробу. Розрахунок та виготовлення шаблонів
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconТворчий проект на тему: Виготовлення іграшкової машинки
Підбір та аналіз матеріалів для виготовлення виробу. Розрахунок та виготовлення шаблонів
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconПольський Б. М., Стеблянко М.І., Чмир Р. Д., Яворський В. С
Мета: Навчитись визначати в лабораторних умовах водопроникність різних за структурою І механічним складом ґрунтів
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconВироби N1 І N2 виготовляються на фрезерних станках. Для їх виготовлення...
Для їх виготовлення є 100 кг металу. Витрата металу на виготовлення одного виробу N1 становить 2 кг, а на N2-4кг. Трудомісткість...
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconМіста Вінниці
Підбір та аналіз матеріалів для виготовлення виробу. Розрахунок та виготовлення шаблонів
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconДослідження переломлення силових ліній стаціонарноо електричного...
Мета роботи: дослідити характер переломлення силових ліній стаціонарного електричного поля на границі розподілу двох середовищ з...
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconТема: Виготовлення штрихових негативів
Мета: Виведення зображення на фототехнічну плівку шляхом її експонування. Виготовлення штрихового фотонегативу
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconВиготовлення препаратів з патологічного матеріалу. Виготовлення нативних...
Дисципліна: «Мікробіологія з основами імунології та технікою мікробіологічних досліджень»
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням iconПлан Роботи на 2012-2013 н р р. Мррд
Висвітлення роботи комісій на сесії. Виготовлення стінгазети до Дня Вчителя. Вітальних листівок. Виготовлення буклету
Виготовлення живильних середовищ різних за складом та призначенням icon4. Зародження економічної теорії як науки. Основні напрями І школи світової економічної думки
Складовою єдиної неподільної науки. Разом з розвитком людського суспільства, матеріального виробництва поступово набувалися досвід...
Додайте кнопку на своєму сайті:
Школьные материалы


База даних захищена авторським правом © 2015
звернутися до адміністрації
skaz.com.ua
Головна сторінка